La crioconservación de germoplasma de castaño y roble, con ejes embrionarios aislados de la semilla y ápices caulinares de material juvenil y adulto para mantener a largo plazo genotipos resistentes a enfermedades o germoplasma elite ya es posible. Tras descongelar el material la investigadora Lorena Jorquera (USC-CSIC) ha conseguido formar plántulas en castaño para comprobar que no hay variabilidad genética, ni se observan diferencias morfológicas ni fisiológicas entre el material crioconservado.
Una tesis doctoral realizada en el Consejo Superior de Investigaciones Científicas (CSIC) ha desarrollo y evaluado técnicas para la crioconservación de germoplasma (material genético) de castaño y roble.
Con esta investigación se ha confirmado que la crioconservación, es decir, la técnica de biotecnología vegetal consistente en la conservación a bajas temperaturas con nitrógeno líquido de material genético, es una alternativa segura para mantener a largo plazo genotipos resistentes a enfermedades o germoplasma élite.
La conservación de recursos genéticos forestales puede realizarse mediante técnicas in situ o ex situ. En esta tesis se han empleado estrategias de cultivo in vitro y la conservación en nitrogeno líquido a bajas temperaturas mediante la técnica de criconservación.
La autora, Lorena Jorquera Martínez, realizó la investigación durante una estancia en el Instituto de Investigaciones Agrobiológicas de Galicia (IIAG-CSIC, Santiago) bajo la dirección de Ana Vietez y Conchi Sánchez, del Grupo de Investigación de Biotecnología Forestal del citado centro.
La tesis, titulada “Crioconservación de ejes embrionarios y ápices caulinares de castaño (Castanea sativa Mill.) y roble (Quercus robur L.)” ha sido defendida en la Universidad de Santiago de Compostela (USC).
Los resultados han dado lugar a la firma de un convenio de colaboración para la transferencia de tecnología entre el IIAG y una empresa de conservación de la naturaleza y desarrollo rural.
Objetivos y resultados
El principal objetivo de la tesis era definir las técnicas para la conservación de material de castaño y roble, utilizando ejes embrionarios de semillas (parte vital de la semilla capaz de germinar y dar lugar a una planta) y ápices de brotes cultivados in vitro procedentes de material juvenil y adulto de ambas especies.
“En los ensayos se desarrolló un protocolo para la crioconservación y posterior recuperación del material vegetal descongelado tras su almacenamiento en nitrógeno líquido a -196ºC”, explican Ana Vieitiez y Conchi Sánchez.
“Con un proceso de crioconservación de ejes embrionarios consistente en la desecación parcial del eje seguido de la inmersión en nitrógeno líquido, se consiguió la formación de plántulas de castaño tras descongelar el material en un 60-63%”, indican.
En cuanto a los ensayos de crioconservación en ápices caulinares, también se lograron altos porcentajes de supervivencia en castaño mediante la aplicación de un proceso de vitrificación, es decir, de un tratamiento con soluciones crioprotectoras.
Finalmente se evaluó la estabilidad genética del material regenerado de castaño después de crioconservación para la detención de posibles variaciones genéticas mediante estudios morfológicos, fisiológicos, biométricos y marcadores moleculares
“Los resultados permiten afirmar que con la crioconservación no hay diferencias morfológicas, fisiológicas ni a nivel genético entre el material crioconservado de castaño y el stock no almacenado en nitrógeno líquido”, indica Lorena Jorquera.
Los resultados de la tesis permiten concluir que la crioconservación es una alternativa segura para conservar material vegetal de castaño porque “se almacena el material a -196ºC con nitrógeno líquido, en condiciones donde tiene lugar la detención de los procesos metabólicos, por un tiempo indefinido, sin alteraciones genéticas, en un espacio reducido, evitando la contaminación y con un mantenimiento mínimo”, concluye Jorquera.
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